微管在APS一云母上的固定和AFM成象

    原子力显微镜(AFM)技术从诞生^[1-3}就以其不同于原有电子显微镜技术的优点在生物样品研究中得到了广泛应用。为了进一步展开对生物样品的研究，除了原子力显微镜的成象方式和针尖制备方法需改进外，制样方法的探索仍然是扩展这一技术在生物样品中应用的一个重要方一面^l4]。特别是近生理条件下的原子力显微镜成象以及动力学过程研究的出现^[5]，带来了样品固定和保持样品活性的矛盾，这对原子力显微镜的制样技术提出了更高的要求。

    由于原子力显微镜技术本身成象方式的要求，对衬底的平整度有着特殊的要求。一般采用有较大晶面的材料作为原子力显微镜的衬底，例如:云母、高序石墨、硅片以及用特殊方法制备的大面积平整的金膜^[6]是通常选用的衬底材料。对一些平整度要求不高的样品，衬底还可以用光学玻璃。但是，山于以上儿种材料一的表!f}1,胜质比较单一，不能适应原子力显微镜的研究对象的复杂多变的要求，所以对衬底材料表面的修饰变得非常重要。

    在硅片、金、以及玻璃表面上的自组织膜技术是一种非常成熟的技术[7]。利于双功能的修饰剂可以得到不同功能团的表而，从而获得不同化学活性的衬底表面，以适应不同研究对象的要求。山于硅片和大[}7积平整的金膜比较昂贵和较大的起伏，而玻璃本身表面起伏太大，所以利用云母的原子级平整表面进行修饰具有非常重要的价值。然而，至今还未有云母表面形成硅烷自组织膜机制的报道，是否能够形成均匀致密的单分子膜也并不十分清楚，所以，制备原子级平整的APS一云母仍然是各国AFM实验室致力于完善的一个基本实验基础。应用APS修饰的云母已经在DNA分子操纵中得到初步应用[8]，且结果非常理想。因此完善APS一云母在生物样品方而的应用有其特殊意义。

    我们通过在云母上修饰APS，发现云母表面仍然保持极好的平整性，_巨明显地改善了衬底对微管的吸附和偶联能力，为进一步的微管动力学研究奠定了基础。

    1实验样品与方法

    在超净工作台上，将新解理的云母浸人新配制的40mL的1% APS水溶液中约3-5min。取出APS修饰的云母用双蒸水充分冲洗，氮气吹干，保存于洁净容器中。

    1:1的新聚合的微管溶液(蛋白浓度为3mg/mL,聚合条件参照文献^[8])与8%的戊二醛混合液滴在APS一云母上，覆盖石蜡膜将溶液展开，固定时间约30min。固定后，用双蒸水漂洗4次，用氮气吹干，暂时保存于干燥器中(保存时间小于8h)。样品尽快用原子力显微镜成象。

    原子力显微镜的成象方式是在大气下的轻敲模式，并且控制成象时的相对湿度小于40%，减小水膜对成象的影响。原子力显微镜和针尖均为Digital Instruments Inc. (SantaBarbara, CA, USA)产品，显微镜型号是Nanoscope IIIao