K4500型血液分析仪试剂的研究与应用

　　K系列血细胞分析仪是日本东亚公司生产的专门用于血液分析的仪器。该机具有用血量少,自动化程度高,测试速度快及提供血细胞参数多等特点,特别是其溶血剂中不含KCN剧毒物,因而受到广大医务工作者的欢迎,所以该仪器在国内的普及率较高。但配套试剂属厂家专利,加之要使用两种溶血剂,不仅需要投入大量成本,加重了病人的负担,而且供应不及时,为了改变这种被动局面,我们经过探索与比较分析,设计研制出适应于该机型使用的配套试剂,现将试剂研制结果与应用情况报告如下:

　　1　材料与方法

　　1.1　仪器　K4500血液分析仪(日本东亚);FM-6冰点渗透压仪(上海医科大仪器厂);DDS-11A型电导率仪(上海理达仪器厂);751型紫外分光光度计(上海分析仪器厂);PH-2S型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)。

　　1.2　试剂

　　1.2.1　自制试剂:①稀释液:6.5 g/L NaCl,0.26 g/LKCl,2.0 g/L硼酸,0.2 g/L硼砂,0.2 g/L EDTA-K2,0.15g/L防腐剂(叠氮钠)。②溶血剂A:10.2 g/L季铵盐,2.0g/L NaCl。③溶血剂B:1.7 g/L SLS,10 ml/L助溶剂(异丙醇)。④清洗剂:每升稀释液中含7.0 ml TritonX-100(分析纯)。

　　将上述配好的稀释液和溶血剂与清洗剂,分别用0.22μm的滤膜在无尘室里过滤两次后再使用。

　　1.2.2　对比试剂:原装进口试剂稀释液、溶血剂、清洗剂。

　　1.3　质控物　定值全血质控4C plus。

　　2　结果

　　2.1　稀释液

　　2.1.1　主要理化参数:见表1。

　　2.1.2　稀释液保存血液的稳定性试验:用30例病人静脉血,同时分成20μl两份,分别放于原装与自制稀释液内,做250倍稀释,用预释法在K4500上测定,结果如表2所示,在4 h之内RBC、HCT、MCV及PLT结果均无显著性改变。

　　各取末梢血20μl于50 ml稀释液中混匀,用10×、40×显微镜观察,红细胞、白细胞和血小板分布均匀,形态完整无皱缩和肿胀、凝聚倾向。

　　2.2　溶血剂

　　2.2.1　两种溶血剂的主要理化参数:见表2。

　　2.2.2　Hb吸收光谱测定:同一份全血标本用稀释液1∶250倍稀释,分别加入自制与进口溶血剂(HGB),同时用HiCN和SLS法进行测定,溶血后分别在751型分光光度计上测定吸光度,结果如图1,用自制溶血剂(HGB)、原装溶血剂(HGB)测得HGB最大吸收峰位于535 nm,与最小吸收波长有50 nm之差,均与SLS法吸收光谱相似,而与HiCN的吸收峰(λmax HiCN=540 nm)有10 nm之差,可是在K系列血液分析仪中用于测定HGB的方法是基于SLS法,由于SLS法与HGB均有固定的吸收峰,且吸收值稳定,所以均可以进行HGB测定。

　　2.2.3　线性试验:取经HiCN法标定HGB为240 g/L的血红蛋白自制备液,分别用自制与进口溶血剂在K4500上测定HGB浓度,结果显示,两种试剂在40～240 g/L浓度之间呈直线关系。