果酒中叶绿素铜钠的测定分光光度法

　　1 前言

　　叶绿酸铜钠是用有机溶剂从蚕沙或绿色植物的叶茎中提取的叶绿素，再经皂化、铜代所得到的墨绿色

　　粉末，是一种半天然色素。在医药、食品及日用工业上有广泛的用途，可在食品加工中作罐头青豆、苦瓜、蕨菜以及糖果、蜜饯、饮料、酒等的着色剂。大量食用会造成人体重金属铜中毒、心血管等疾病。我国食品添加剂卫生标准(GB 2760-96)中规定叶绿素铜钠盐在食品中最大使用量为0.5g/kg，有了规定的限量，没有定量的方法作正确的检测也就无法监控。为了确保安全，建立一个高效、准确的测定叶绿素铜钠的方法是势在必行的。

　　本方法是目前对于果酒中叶绿素铜钠的检测最直接的方法。叶绿素铜钠的分析方法国外报道的有溶剂抽提法、氧化铝柱、聚酰胺薄层分析法等。但是，柱法操作复杂、时间长，难以避免色素分解、褪色。因此，本方法立足于运用常规的化学检测方法，采用了聚酰胺吸附法经过系统改进，试验得到了快速、简易、良好的效果。

　　2 检测方法

　　2.1 试剂与仪器

　　2.1.1 试剂与材料

　　a) 聚酰胺粉，80 目～120 目。

　　b) 无水甲醇、冰乙酸、氢氧化钠、乙酸铵，均为分析纯。

　　c)0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取0.400g氢氧化钠至 100mL 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，于试剂瓶中保存。

　　d) 4mol/L 氢氧化钠溶液：称取 16.0g 氢氧化钠，至 100mL 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，于试剂瓶中保存。

　　e) 0.2mol/L乙酸铵缓冲液：称取7.708g乙酸铵，至 500mL 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，于棕色试剂瓶中保存。

　　f)解吸液：0.1mol/L氢氧化钠:无水甲醇溶液=1:10(V/V)。

　　g)叶绿素铜钠标准品：≥99.7%

　　h) 标准储备溶液：精确称取按其纯度折算为100% 质量的叶绿素铜钠标准品 0.0500g，于 100mL棕色容量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，此溶液浓度为 500 μ g/mL，需当天配置。

　　2.1.2 仪器设备

　　a) 紫外可见分光光度计。

　　b) 砂芯漏斗 G3。

　　c) 溶剂过滤器。

　　2.2 操作步骤

　　2.2.1 标准曲线的制备与测定

　　2.2.1.1 标准工作溶液的配制

　　精确移取500μg/mL标准溶液10mL 至100mL烧杯中，加入 0.2mol/L 的乙酸铵溶液 30mL，用冰乙酸调pH至5～6。加入3.0g聚酰胺粉，充分搅拌2min，避光静置 5min，用 G3 砂芯漏斗抽滤。再用约 200mL蒸馏水充分洗涤，弃去滤液。用 75mL 解吸液分三次解吸色素，每次倒入约 25mL 解吸液，浸泡 2min ，再摇匀2min，抽滤并用10mL解吸液洗净抽滤瓶中残液。收集滤液，用解吸液定容至100mL，配制成浓度为 50 μg/mL 的标准溶液，此溶液临用时配制。