显微分光光度法及其在物证分析中的应用

　　通过显微分光光度计测定光的吸收、透射、反射、荧光谱图，从而对物质成分进行定性和定量分析的方法称为显微分光光度法。一、显微分光光度法的原理

　　(一)照射在不透明的物体表面的白光，一部分被反射，一部分被吸收，一部分被透过;如果物体的表面很粗糙，就会产生表面的漫反射，即各个方向的表面反射。如果物体表面呈镜面，入射光的反射就称为镜面反射。

　　不同物质其结构和表面形态不同，对某些波长光的吸收、透射、反射及荧光特性不同，物体对入射光按波长进行选择吸收。这种吸收量对波长的依赖关系是由该物质的化学结构决定的。因此，当从光源来的光经过不同化学结构的样品时发生选择吸收、反射和散射之后，再进入分光光度计，经过单色器分光后，再经过相应的光电转换器，就可以得到该样品的吸收光谱图。

　　因此从样品的吸收光谱图，就可以了解样品中成分的含量，可以了解不同样品的化学结构是否存在差异。

　　(二)显微分光光度计测定色差的原理。按照国际颜色标准给出样品颜色的多种色度学参数，对样品的颜色进行测量。这在刑事技术中的有色微量物证比对检验中十分重要。一般用三种颜色表示物体的颜色，即三原色:红、蓝、绿。每种样品颜色所包含三原色的量，通常称三色值(三刺激值)，分别用X, Y, Z表示某种样品颜色红、绿、蓝所占的比例用的色度坐标x, y, z表示，即x=X/(X+Y+Z);y=Y/(X+Y+Z) : z=Z/(X+Y+Z); z+y+x=10

　　将x, y, z经转换成色度值L*, a*, b*，一种有色物证可以得出一组L*,, a*i, b*,，另一种有色物证可以得出一组L*z" a*z" b*z，各项色度之差△L*=L*1-L*z } }a * =ai*-az* Ob * =b,*-bz*}色差△}}(}L*)z}}a*)z }}b*)zyn。对不同颜色的徽t物证，色度值不同，产生色差。所以可用该数值进行鉴别。

　　二、显徽分光光度计的组成

　　目前使用的显微分光光度计绝大部分是国外生产的，尽管各厂家的仪器性能有差异，但是其主要构造不外乎有四个部分组成:显微镜(透射、反射、、荧光、偏光等)、分光光度计(衍射光栅、光电池、检测器)、计算机系统和输出系统(打印、照相机、显示器)见图1。

　　三、显徽分光光度法的特点

　　显微分光光度法所用样品量少，样品直径小于2.5 } m仍可以捕捉到这些微小样本的信息:显微分光光度测量对样品制备技术要求非常简单，对于大多数检材基本上不需要进行前处理，不破坏检材。这些特点在刑事科学检验中十分重要，因为现代微量物证鉴定都是采用综合检测手段。即对于一个物证要采用多种方法进行检验，要按照先无损、后破坏:先宏观、后微观;先物理、后化学的原则，进行综合分析。显微分光光度检验方法是无损检验方法，具有很大的优越性;速度快，光谱数据可在8毫秒收集完成;辨率高，可见光范围内达0.8nm。