奶粉样品中胆固醇的气相色谱外标法测定

　　胆固醇是食品中的重要组分之一， 准确地测定奶粉样品中的胆固醇含量对指导婴儿或中老年人的健康膳食具有重要意义。 食品样品中的胆固醇气相色谱法测定通常采用GB9695.24-2008方法， 但在实际操作中该法存在操作繁琐、有机溶剂消耗大、样品的测定结果重复性较差等缺点。 本实验通过校测不同脂肪含量对奶粉中胆固醇测定的影响， 从而对奶粉样品的胆固醇气相色谱外标法测定作了改进， 完善了此类样品的检测过程，得到满意的结果。

　　一、材料与方法

　　1.试剂与设备

　　乙醚 (分析纯)、 石油醚 (分析纯)， 氯化钠溶液(100g/L)。KOH-乙醇溶液(1mol/L)：称量12gKOH(分析纯)，加入200mL无水乙醇搅拌混匀充分溶解，冷却后装入广口塑料瓶内，然后放入冰箱以4℃储存，最后取其上层澄清溶液使用。 脂肪基底溶液(0.1g/mL)：取市售猪油，准确称量10g，以氯仿充分溶解移入100mL容量瓶，再以氯仿定容至刻度。设备包括具塞量筒、回流皂化器、恒温水浴锅、分析天平、HP6890 Plus气相色谱仪等。

　　2.实验方法

　　(1)奶粉样品的脂肪提取

　　奶粉样品中的脂肪提取采用哥特罗-罗紫法(参照GB5009.46-2003)，本实验检测了两种奶粉样品 ，即已充分混合均匀的低脂、全脂奶粉。首先测定样品的脂肪比例，根据样品的脂肪含量不同脱脂奶粉称取2.0g，全脂奶粉称取1.0g左右。 全量提取后的石油醚-乙醚溶液取45mL，待溶剂旋转挥发干燥称重后分别显示提取出脂肪量约0.1g(低脂奶粉)、0.4g(高脂奶粉)。 需要检测胆固醇的样品提取液在旋转瓶挥发完毕后无需转移，直接进入下一步皂化程序。

　　(2)皂化

　　在每个皂化瓶中加入1mol/L的KOH-乙醇溶液皂化液5mL，混匀后，90℃恒温回流皂化1h，取下稍混匀数次，将皂化液转移至20mL比色管内，加1mL100g/L的氯化钠溶液于皂化瓶中充分溶解未完全转移的皂化液体， 再加4mL氯化钠溶液于皂化瓶震荡全量转移至20mL比色管中，凉水冷却。

　　(3)提取

　　在每个比色管中加入5mL石油醚， 密闭管口剧烈震荡5min，静置分层30min后待检。

　　(4)绘制胆固醇工作曲线

　　根据样品提取出的脂肪量分别制作相应的工作曲线，在工作曲线各点加入与样品基体相当的脂肪基体，本实验针对低脂、高脂奶粉样品分别制作工作曲线1与工作曲线2(见图1)。 工作曲线1：取5只皂化瓶，各加入自行配制的脂肪基体溶液0.1mL，再分别加入胆固醇标准 溶 液 0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL 旋 转 蒸 发 吹干，则每点加入的脂肪为0.1g，仿照样品皂化处理，该工作曲线适用于低脂奶粉样品的检测。工作曲线2各点加入脂肪基体溶液0.4mL，余同前，该曲线适用于高脂奶粉样品检测。