压电免疫传感器再生能力试验研究

　　压电石英晶体免疫传感器(piezoelectric quartz crystal immunosensor)作为一种新型生物传感器, 是利用石英晶体对质量变化的敏感性,结合生物识别系统(抗原抗体特异性结合)而形成的一种自动化分析检测系统,具有灵敏度高、特异性好、响应快、小型简便等特点。可对多种抗原或抗体进行实时、快速、在线、连续的定量测定及反应动力学研究,克服了酶联免疫分析法(ELISA)、放射免疫分析法 (RIA)、荧光免疫分析法(FIA)等免疫检测方法费时、昂贵、标记及操作繁琐等缺点,具有极广泛的发展前景及临床使用价值,成为生物传感器领域的研究热点[1,2]。

　　生物传感器商业化要具备以下几个条件:足够的敏感性和准确性、易操作、价格便宜、易于批量生产并能在生产过程中进行质量监测。其中,价格便宜决定了传感器在市场上有无竞争力。而在各种生物传感器中,压电石英晶体免疫传感器最大的优点就是成本低、操作简便、设备简单,因此在市场上的前景是十分巨大和诱人的。电极的再生是发展免疫传感器中重要的一环,再生使用使石英晶体免疫传感器的价格大大降低。由于抗原抗体结合能力强, 反应后不易分开,要使免疫传感器重复使用,就要用一些试剂将抗原抗体复合物解离或从传感器表面全部清洗下来,前者还需不损害固相抗原或抗体的活性。用于解离或洗涤的试剂有柠檬酸盐缓冲液、乙醇胺、磷酸盐2柠檬酸缓冲液、强酸强碱加超声清洗、甘氨酸2盐酸缓冲液、二乙胺、丙酸、乙二醇[3]、尿素[4]、盐酸胍缓冲液[5]和四氢呋喃[6]等。可用于传感器再生的试剂很多,在具体操作过程中应根据固定技术的不同及所包被抗原、抗体的不同,选择相应的试剂及作用时间。

　　1　材料与方法

　　1·1　实验材料

　　1·1·1　AT切型、双面镀金电极、基频10MHz的石英晶体　采用自制2×5路独立的自激式振荡电路单元组成阵列式检测电路模块(信息产业部电子第26研究所),频率信号为TTL电平输出;将检测电路模块封装于不锈钢金属壳内,并设置恒温、屏蔽和防震装置,组装成2×5路压电石英晶体传感器振荡频率检测平台(中国嘉陵集团)。自行设计的《PESA 2·0频率采集分析软件》具有频率计数、差值显示和频率变化趋势图显示等功能。自行改进后的多通道PCL2836多功能频率计数卡(台湾研发公司产品)内置于方正计算机。

　　1·1·2　仪器　IMMAGE特定蛋白分析仪(美国Beckman公司产品)。

　　1·1·3　试剂　抗人免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)单克隆抗体(美国Beckman公司);抗人免疫球蛋白(IgD、IgE)单克隆抗体(美国Nordic公司);葡萄球菌A蛋白(SPA)(美国Pierce公司产品);人免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)标准血清(美国Beckman公司);人免疫球蛋白(IgD、IgE)标准血清(北京生物制品研究所);牛血清白蛋白(BSA)(Sigma公司);PBS缓冲液:0·05M,pH 7·2,NaCl(9g/L)自行配制;1·0M、1·2M的NaOH溶液;1·0M的HCl溶液;8·0M的尿素溶液;95%的乙醇溶液(自行配制);IgD、IgE ELISA试剂盒(天津新传生物工程公司);所用其他试剂均为AR级。