超高效液相色谱的七年之痒:未来在何方

　　Robert STEVENSON

　　在2004年的匹兹堡会议上，Waters公司(Milford,MA)介绍了一种能够承受最高压力为15 000 psi的ACQUITY UPLC色谱仪，从而导致生产色谱仪器的其他公司不得不加快步伐追赶。随着他们的竞争，造成的后果包括引起忧虑、不确定性和怀疑(FUD)。然而直到2010年春季，市场上最大的7家供应商每一家都才分别推出可以与之竞争的仪器，其中一些仪器的最大压力超过5 000 psi。而对于使用者来说，受益是实实在在的，并且经常带来比预期更有价值的利益。很多关于销售的争论已经抛诸脑后。因此，让我们看看在七年之后UPLC会在未来带来什么。

　　首先让我们来看看使用者所认知的来自超高效液相色谱(UHPLC)技术的好处。分析的速度和通量上的直接改进是很明显的，并且这是可以预期的结果，但是还有更多的好处。由于峰宽减小和标准分析柱的直径减少(从4 mm到2 mm甚至到更小)，检测灵敏度提高了好几倍。大多数早期的仪器使用者，并没有预见到由于工作流程和分析速度的改进会使效率有很明显的提高。用户发现在很多情况下，接近实时或是实时的结果会帮助决策的制定。这在生产层面是决定性的。Waters公司很快就发展在过程层面上的ACQUITY，对象是拥有ACQUITY PATROLTM的实验室。尽管采用新技术和工作流程的程序设置比较慢，但是PATROL色谱仪正在迅速地得到关注，尤其是对医药品生产的支持。毫无疑问，美国食品和药品管理局(PDA)主动推广的过程分析技术(PAT)正在起着积极的作用。

　　人们通常关注的一个问题是：传统方法能够过渡到UHPLC上吗?答案是依情况而定。如果这个方法包括等度洗脱，流速是通过与柱内径的比例简单地下降，它保证了线性速率相同。通过柱长的变化比例减少运行时间，同时还需要检查数据系统通过比较临界峰对之间的分辨率来处理窄峰的能力。在大多数情况下，所有上述情况非常简单。最多也就是创建一个新的保留时间表。如果需要更高的可信度，可以对两个仪器进行可能一个月的平行实验，对结果进行比较，结果应该是一致的。

　　对于梯度洗脱，系统死体积是不一样的。例如，Agilent (Wilmington, DE)推出的Jet Weaver混合器有10到35 μL的死体积，其依赖于所混合体系的成分。这个死体积(混合)是大大小于1100系列液相色谱仪的死体积，所以梯度斜率比一般的(1100)混合器陡峭得多。大多数供应商已经实现通过计算机来转换色谱方法，并且考虑到了流速设置的改变。DryLab(Molnar Institude,Berlin,Germany)也扩展了这项功能，其中还包含耐用性评价。

　　尽管如此，如果构建的方法不好，在过渡过程中可能就会有很大变化以至于需要新的研究来进行确认。实际上，Agilent已经考虑到从1260和1290与更老型号仪器的连接程序包。例如，如果在Agilent1100系列仪器上有一个经过验证的方法，1290就能够被“解调谐”给出与1100仪器相类似的性能。通过新旧仪器的比较，然后就能够得到相应的结果(保留时间和临界峰对的分辨率)。通过在适当的位置从1100连接到1290仪器平台，就很容易通过改变方法达到利用1290仪器潜在性能的目的，或者更简单的，只用一个梯度控制来减少其斜率。至少在一些情况下这种运行模式的效果非常好。