超高效液相色谱法测定糕点中丙酸钙含量的测量不确定度评定

　　一、材料方法

　　1.材料与试剂

　　超高效液相色谱仪： 美国Waters公司;KQ2200超声波清洗器： 昆山市超声仪器有限公司;TGL-16A高速离心机：长沙平凡仪器仪表有限公司;丙酸钙纯度标准物质GBW(E)100078，样品编号为07001：自中国计量科学研究院购买。

　　2.方法

　　(1)样品的处理与测定

　　准确称取捣碎混匀的糕点5.0446g至100mL烧杯中，加水20mL，加入1mol/L磷酸溶液0.5mL，混匀，经超声浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH值至3左右，转移试样至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。 将试样全部 转 至50mL具 塞 塑 料 离 心 管 中 ， 以8000r/min离 心10min，取上清液，经0.45μm微孔水相滤膜过滤后，进行高效液相色谱测定。

　　(2)色谱条件

　　色谱柱：Waters C18 (50mm×2.1mm，1.7μm); 流动相：1.5g/L磷酸氢二铵溶液，pH值：3.0;流速：0.3mL/min;柱温：25℃;进样量：5.00μL;检测波长：214nm。

　　3.标准配制

　　准确称取丙酸钙标准物质0.63g， 用水定容于50mL容量瓶中，配制成10mg/mL的标准贮备液。 准确吸取5.0mL标准贮备液于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度 ，配制成1.0mg/mL的标准工作液。 再吸取标准工作液0.25mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL 至 10mL 容量瓶中，分别加入1mol/L磷酸溶液0.2mL，用水定容至10mL，混匀。 其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.025mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL，经0.45μm微孔水相滤膜过滤后， 进行高效液相色谱测定。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

　　二、数学模型

　　根据样品测定方法建立的不确定度数学模型如下：

　　式中：X———样品中丙酸钙含量 (以丙酸计)，g/kg;c———由标准曲线得出的样液中丙酸的浓度 ，mg/mL;V———样液最后定容体积，mL;m———样品质量，g;f———稀释倍数;R———回收率。

　　三、测量不确定度的分析与评定

　　1.标准溶液浓度产生的相对标准不确定度 urel(c)(见表1)

　　(1)丙酸钙标准物质的相对标准不确定度urel(P)根据标准物质证书提供的丙酸钙纯度为99.7%，相对扩展不确定度为0.6%(k=2)，则urel(P)=3×10-3。

　　(2)丙酸钙标准物质称量产生的相对标准不确定urel(m1)因配置丙酸钙标准溶液需称取0.63g丙酸钙标准物质，实际称得0.6301g。 称量不确定度来自两个方面：

　　第一，称量变动性，根据提供的天平资料显示，其变动性标准偏差为0.1mg，则其不确定度为