新型BACTECMGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪及其应用

　　传统检测结核分枝杆菌的方法简单、经济、易于推广使用,但是存在着检测周期长、阳性检出率低、不易标准化、费时费力等缺点(完成标本分离培养、菌型鉴定、药物敏感试验全部过程需要耗时2~3个月)。如何快速检测结核分枝杆菌已成为该领域中迫切解决的课题。二十世纪七十年代末,世界上第一全自动分枝杆菌培养鉴定仪BACTEC 460TB研制成功,使快速分离结核分枝杆菌成为现实,但由于当时科学技术的限制,其采用放射性14C棕榈酸为底物,检测反应过程中释放出的含有放射性的14CO2计算出其生长指数GL。随着科学技术的进步,该系统不断改进完善,新式机型不断涌现,更加适合现代临床检验学发展的需要。美国JOHNSTON实验室公司(TOWSON,MD)于1996年新研制成功了无放射性污染BACTEC MGIT 960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪,实现了分枝杆菌安全、环保、无放射性检测。在亚洲地区我院于1998年底率先引进了该仪器。为了解其性能在实际工作中的应用,我们运用不同的实验方法进行对比分析研究,得到较好的结果。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料:L-J(罗氏)培养基(自制),BD公司BACTECMGIT 960全自动分枝杆菌快速培养鉴定药敏仪及其配套试剂(包括MGIT培养管、MGIT OADC营养添加剂、PAN-TA杂菌抑制剂),BACTEC 460 TB全自动分枝杆菌培养鉴定仪及其配套试剂,MGIT 7H9培养基(购自BD公司),标本消化/去污染处理液(自制),聚合酶链反应(PCR)试剂自制。

　　检测标本90例,系我院未确诊住院病人送检标本,种类包括:痰液69例、尿液10例、胸腹水5例、脑脊液3例、关节液2例、淋巴液1例。

　　1.2　方法:将MGIT培养管在无菌条件下分别加入0.8mlMGIT PANTA/OADC混合液备用。送检标本经常规消化

　　去污染浓缩处理后,分别接种于L_J(罗氏)培养基及已准备好的12B培养瓶和MGIT培养管中,将MGIT培养管置入BACTEC MGIT 960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪孵育培养。BACTEC MGIT 960荧光强度记忆探测器每隔60分钟连续测定培养管内荧光强度,判断管内分枝杆菌的生长情况。若出现阳性标本,仪器红色指示灯立即闪亮,同时有报警提示音。按仪器操作步骤提示取出阳性标本,并自动打印出结果。

　　1.3　BACTEC MGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪的应用原理是:该仪器采用荧光法的原理,MGIT培养

　　管底部包埋有荧光显示剂,直接感应培养管内氧气浓度。当培养管内有分枝杆菌生长时,氧气被消耗,荧光显示剂在

　　二极管的激发下发出荧光, BACTEC MGIT 960荧光强度记忆探测器每隔60分钟连续测定培养管内荧光强度,并通过数据处理得出阳性结果,以生长单位(GU,Growth Unit)形式报告,并直接打印出结果。阳性培养管取出后直接涂片进行抗酸染色以确定是否为分枝杆菌,并可立即分离分枝杆菌的菌种,制备菌悬液,第二次接种于预先配制好的含