反相高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定清火栀麦片中栀子苷的含量

　　清火栀麦片由穿心莲、栀子和麦冬三味中药组成，具有清热解毒，凉血消肿功效，用于咽喉肿痛，发热，牙痛，目赤等症[1]。栀子为清火栀麦片的主药，栀子苷为栀子的主要有效成分[2,3]，中国药典2 0 0 5 版规定按干燥品计算，栀子中含栀子苷(C17H24O10)不得少于1.8 %，清火栀麦片中栀子苷的含量不得低于1.2 mg/片[4]，因此对其含量的测定是控制成药质量的关键。目前有关文献报道清火栀麦片中栀子苷含量的高效液相色谱测定方法较多，但均采用常规紫外检测器[5，6]，定性能力较差。本试验以甲醇-水为流动相，建立了高效液相色谱-光电二极管检测器联用法测定了清火栀麦片中栀子苷的含量，并进行了方法学考察和栀子苷的定性分析。方法操作简便，结果准确可靠，可用于清火栀麦片中栀子苷的含量测定。

　　1 仪器与试药

　　Waters高效液相色谱仪(515泵，2996光电二极管矩阵检测器，7725I 进样阀，柱温箱，Empower 中文色谱工作站)，RO-MB-10D 高纯水机(杭州永洁达膜分离设备厂)，FC204分析天平(上海天平分析仪器厂)，SK-2510HP 超声提取仪器(上海汉克科学仪器有限公司) 。甲醇为色谱纯(上海陆忠试剂厂)，水为高纯水，乙醇为分析纯(95%，江西同盟试剂化工厂)，栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110749-200410，供含量测定用)。清火栀麦片(广西天天乐药业有限公司：批号 061101;广西恒拓集团仁盛制药有限公司：批号 061102;广西千珍制药有限公司：批号 060528;江西药都樟树制药有限公司：批号 061108)，均为市售品。

　　2 方法与结果

　　2.1 溶液的制备

　　2.1.1 对照品溶液的制备

　　精密称取栀子苷对照品5.35 mg，置于10 ml容量瓶中，加入适量甲醇溶解，定容，摇匀后作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液1 ml，置于10 ml容量瓶中，用甲醇将其稀释为含栀子苷0.0535 mg/ml的对照品溶液，备用。

　　2.1.2 样品溶液的制备

　　取清火栀麦片样品 10 片，精密称定，计算平均片重。研细后精密称约1 g，置50 ml容量瓶中，加入 95 % 乙醇溶液 35 ml，超声波处理 60 min，95%乙醇定容至刻度，摇匀。经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为样品溶液。

　　2.2 测定波长的选择

　　取栀子苷对照品和清火栀麦片样品溶液进样，在190~600 nm波长范围内进行三维扫描。提取栀子苷在流动相中的紫外吸收光谱，对照品和样品中栀子苷的最大吸收波长均为 239.8 nm，紫外吸收光谱一致(见图 1)，故选择检测波长为 240 nm。

　　2.3 峰纯度检测

　　采用 Empower 色谱软件适应性模块对栀子苷色谱峰进行峰纯度分析，对照品和样品中栀子苷色谱峰的纯度角值均小于阈值，纯度角线均位于自动阈值线下方，证实色谱峰为单一组分吸收峰。栀子苷的色谱峰纯度分析见图 2 。