HPLC法测定保健食品中大黄素

　　0　引言

　　大黄素是从大黄的干燥根及根茎提取而得,味苦,具有泻热通肠,凉血解毒,逐瘀通经等功效。近20年来,我国很多专家已经出版了大量的专著和研究论文,证明了大黄素在减肥、降脂、排毒、抗衰老等方面有很大的作用。目前,大黄素的检测方法有薄层色谱法[1]和液相色谱法[2, 3]。而薄层色谱法干扰大,不适用于复杂样品的分析。液相色谱法灵敏度高,分离度好。本实验建立了保健食品中大黄素的测定方法,该方法快速、简便及准确可靠。

　　1　实验部分

　　1. 1　仪器与试剂

　　仪器: Waters1525型高效液相色谱仪,配有2487型紫外检测器, Breeze工作站;M-50型微孔滤膜环式滤器; Mettler-AE100型电子天平;试剂:大黄素对照品(由中国药品生物制品检定所提供),乙腈(色谱纯),乙醚、甲醇、磷酸、硫酸、无水硫酸钠均为分析纯,二次蒸馏水。

　　1. 2　色谱条件

　　色谱柱:柱(250×4. 6mm, 5μm);流动相:A泵乙腈,B泵0. 2%磷酸水溶液(A∶B=60∶40);流速: 1. 0mL/min;柱温:室温;检测波长:225nm;进样量: 20μL。

　　1. 3　标准曲线的绘制

　　称取10mg对照品于50mL容量瓶中,用甲醇稀释溶解定容,再分取一定体积于50mL容量瓶中,用甲醇稀释溶解定容,分别配制成含大黄素4μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的标准使用液,上机测定,以峰面积为X,浓度(μg/mL)为Y计算出线性方程为,相关系数r=0.9999,线性良好。

　　1. 4　样品预处理

　　1. 4. 1　液体样品

　　量取一定体积样品,加入硫酸20mL,置沸水浴上加热回流30min,放冷,用乙醚提取5次,每次5mL,合并乙醚液,用水洗至中性,过无水硫酸钠后旋转蒸发挥至近干,再用氮气吹干,残渣加甲醇适量溶解,移至50mL容量瓶中,加甲醇稀释于刻度。经0. 45μm滤膜过滤,作为上机待测液。

　　1. 4. 2　固体样品

　　称取1g置索氏提取器中,加甲醇50mL,置于80℃水浴上加热回流至无色,提取液置水浴上蒸干,蒸干的残渣用硫酸20ml溶解,按1.4.1处理。

　　2　结果与讨论

　　2. 1　色谱条件的选择

　　实验采用双波长同时测定,结果发现,在225nm下测定,大黄素更灵敏,而且杂质吸收强度低,所以选用225nm作为测定波长。流动相用磷酸水溶液不但峰形好,而且对仪器损害小。流动相比例不但可以出峰快,而且可以完全分离(见图1、图2)。

　　2. 2　样品处理方法的选择

　　本实验采用同一液体样品直接用乙醚提取和酸水解提取做对比,结果表明,直接提取的样品含量远低于酸水解后的样品。酸水解又采用盐酸与硫酸同浓度做对比,结果表面,两种酸无明显区别,硫酸水解的结果含量稍微高点。