金顶侧耳液体培养基优化研究及其应用

　　金顶侧耳 PleurotuscitrinopileatusSing，又名榆黄蘑，属担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属。金顶侧耳属高营养、低热量的一级绿色食品。长期食用，有降血压、降胆固醇等功效。验方中记载其可治疗肌肉萎缩、痢疾，亦有抗肿瘤、抗病毒、抗自由基、调节机体免疫功能的作用。关于金顶侧耳的研究，多见于栽培学、分子生物学、药用营养学以及化学成分的研究[1，2]，而对其液体发酵培养的研究还比较少。Cheung以豆浆残渣为原料，深层培养金顶侧耳并与子实体进行了成分比较[3]。Pani BK & Das SR[4]、王谦等[5]经过筛选，确定了金顶侧耳液体培养的适宜碳源为葡萄糖和玉米粉，适宜氮源为酵母膏和豆饼粉。张桂春等[6]对一些碳氮源、无机盐进行了量上的初步筛选。本文正是在此基础上对金顶侧耳液体培养基中两种无机盐及生长因子 VB1进行了进一步的量化筛选，旨在确定更适合培养金顶侧耳的液体培养基。同时，设计比较了液体与固体菌种分别用于育菇的两种生产模式，分析了液体菌种的应用价值，为开发利用金顶侧耳提供一定的实验依据。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料与设备

　　菌种：Pleurotus citrinopileatus Sing 菌种为固体三级栽培种，由长春理工大学生命科学技术学院生物工程系实验室提供，4℃低温保存。

　　仪器：U-2800紫外可见分光光度计、垂直流超净工作台、恒温培养箱、旋转式恒温摇床、超声波细胞粉碎机。

　　1.2 实验过程

　　1.2.1 金顶侧耳的出菇栽培

　　160%加水配制出菇培养基，分装培养瓶灭菌后备用，按每瓶20~30g接种量接种固体三级栽培种;25℃暗处恒温培养至培养瓶长满菌丝后，调整好菇房条件，待子实体原基形成后以散射光诱导出菇。

　　1.2.2 金顶侧耳平皿固体母种的制备

　　配制 PDA 母种培养基，灭菌倒平板后备用;准备灭菌小烧杯两只，金顶侧耳出菇后，两人配合，用酒精擦拭后的手术剪刀快速剪下少许新鲜子实体的菌盖于小烧杯中，采集子实体组织样，带回实验室。在超净工作台内，用灭菌酒精棉将子实体表面仔细擦洗，再用灭菌手术刀片刮削去表层后用灭菌手术剪刀从内部剪下一些组织块，接种于准备好的PDA 母种培养基中，每皿 2~4 块，25℃倒扣在恒温培养箱内暗处培养 7d 得平皿固体母种。

　　1.2.3 金顶侧耳一级、二级摇瓶液体菌种的制备

　　配制一、二级液体培养基，分装至 250ml锥形瓶，每瓶 100ml，灭菌备用;取固体平皿母种，选取菌丝密集区域，用灭菌接种铲取 2×2cm2大小平皿固体母种，迅速接种于一级液体培养瓶中，并迅速用封口膜包扎封口;恒温摇床内，25℃，170r/min 暗处培养 7d 后即可得一级液体菌种。取 10%的一级液体菌种接种于二级液体培养基中，同等条件下培养 7d 得二级液体菌种。