明胶氧化产物的分子量分布

    氧化明胶是最近二十年来开发并逐步完善起来的一个照相明胶的新品种.文献中Moll[1]等做过氧化明胶的制备及性质的研究.Maskasky[2]做过氧化明胶对卤化银晶形的调变作用的研究.明胶的氧化深度对于明胶卤化银乳剂微晶性能有重要的影响.然而,深度的氧化是否会导致明胶分子量分布的变化,文献中还没有有关报道.

    明胶中的小于A、A1、A2、B、C以及大于C这6个不同构象组份的相对含量,对乳剂涂层的物理性能,如胶冻强度、粘度等都有很大的影响.明胶中含有过多的小于A的分子或大于C的分子都会给乳剂涂布过程带来弊端.只有这6个不同的构象组份按一定的比例分布时,才有可能满足多种物理性能的要求.因此,测定明胶氧化过程中分子量分布的变化具有重要的意义[3].近年来,陈丽娟[4]等人对SDS-PAGE梯度电泳用于明胶全构象的分析取得了成功.本文就是利用这一方法经改进后对明胶氧化产物的分子量分布进行测定和构象表征的.

    用改进的SDS-PAGE凝胶电泳法对明胶氧化产物的分子量分布进行测定的结果表明:当氧化时间小于24h,H2O2用量低于60mmol/g胶时,分子量各组的分布没有太大的变化.这是H2O2氧化明胶的临界条件.

    1 实验

    1.1 氧化明胶样品的制备[5]

    称取2g明胶样品,加95mL去离子水,溶胀20min,在40~50e下使明胶完全溶解.用0.35mol#L-1的氢氧化钠溶液把明胶溶液的pH值调至7.1.接着加入不同体积的0.058mol#L-1的H2O2,最后使溶液的总体积为100mL(Q=0.02),编号.将处理好的明胶溶液置于40?1e的恒温水浴中氧化.

    1.2  聚丙烯酰胺凝胶电泳

    SDS-PAGE是基于充分利用聚丙烯酰胺凝胶分子筛效应而发展起来的方法[6].在电泳系统中加入一定量的阴离子表面活性剂)SDS, SDS便以一定的比例与蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质分子带负电.由于这种负电荷远远超过了蛋白质分子本身原有的电荷,因此消除了不同蛋白质分子间的电荷差别.当SDS的浓度大于8@10-4mol#L-1时,SDS与蛋白质的结合比是1.4 g SDS/g蛋白质.因此,只要大于一定的SDS浓度,蛋白质所带的电荷都是相同的.此时,电泳迁移率就只取决于蛋白质分子的大小.当把SDS-蛋白质复合体置于聚丙烯酰胺凝胶这样一种具有分子筛效应的体系之中进行电泳时,分子量大的SDS-蛋白质复合体受到的阻力就大,迁移率下降.因此,可以把不同分子量的各个组份分离开来.在一定的分子量范围内,蛋白质分子量的对数与电泳迁移率成反比.因此将未知物分子量的相对迁移率与已知分子量的物质的相对迁移率相比较,就可以测出未知化合物的分子量.

    凝胶模板的制备方法是:在两只编号为A、B的50mL小烧杯中按文献[4]中所述方法和顺序配制凝胶模板制备液的Ñ、Ò两溶液.用真空泵脱气10min,从真空泵中取出Ñ、Ò两溶液后加入四甲基乙二胺(TEMED),将Ñ、Ò两溶液借助梯度混合器全部注入玻璃板之间,立即嵌入多孔梳形膜具槽.待凝胶模板定型后(约1h)轻轻取出梳形模具槽.