高效液相色谱仪的常见故障及简易排除方法

　　高效液相色谱和高效液相色谱 - 质谱联用是当前发展迅速的，分析范围很广的一种分析方法。在使用过程中总会出现一些影响检测结果的准确度和实验的正常运行。本文罗列了我们在日常使用 HPLC时碰到的六个方面的问题及初步的解决方法，提出来供交流、参考和借鉴。

　　1　HPLC 泵无压力显示

　　原因分析(：1)漏液(;2)单向阀堵塞，解决方法：①拆下后分别按下列顺序，即水、甲醇、10% 异丙醇、甲醇，超声清洗 15 ～ 20min;②上述方法不行，把不锈钢的单向阀放在沸水浴中煮 30min，然后再按⑴的清洗过程进行。

　　2　LCMS 的 LC 泵压力不稳原因分析：

　　(1)有气泡。解决方法：不接色谱柱，以 3mL/min 的大流速冲洗系统 3 次以上。

　　(2)在线过滤器或者溶剂滤头过脏。解决方法：拆下后分别用水、甲醇、10% 异丙醇、甲醇，超声清洗15min。

　　(3)单向阀拆下按上述方法清洗。解决方法：拆下后分别用水、甲醇、10% 异丙醇、甲醇，超声清洗15min。

　　(4)比例阀脏。解决方法：用 5% 异丙醇 1mL/min 流速冲洗比例阀 30min。

　　(5)HPLC 系统脏。解决方法：卸下色谱柱，用70℃热水冲洗系统 20 分钟，然后按 1.1.2 所述溶剂顺序清洗。

　　LC 泵压力过高

　　原因分析：

　　(1)溶剂过滤装置污染。解决方法：用 10% 硝酸水溶液浸泡 30min 后超声浴中清洗(对金属网格不适用)，然后按 1 大节所述溶剂顺序清洗。注意：流动相溶剂一定要经 0.45μm 滤膜后再使用;水相至少要 2 天更换一次。(对痕量分析，应当每天更换一次水相)

　　(2)溶剂过滤头脏。①如果是聚四氟乙烯(PTFE)材料或者是不锈钢材料，解决方法：拆下后，按 1 大节所述溶剂顺序清洗。②如果是玻璃材料，解决方法：不能进行超声清洗，可以用 10% 硝酸水溶液浸泡 30min 后用超纯水清洗滤头。

　　(3)色谱柱前的在线过滤器堵。解决方法：清洗过滤器，先放在水中、甲醇中超声清洗 15min。

　　(4)色谱柱堵。解决方法：用适当溶剂可以进行色谱柱反冲(此方法适用于可以进行反冲的柱子，且针对曾经在流动相中用过缓冲溶液，先用超纯水冲洗后再用有机溶剂冲洗)。色谱柱最好加预柱，在预柱前的管路系统中增加在线过滤装置。

　　4　色谱图上出现非期望的峰

　　原因分析：

　　4.1　色谱柱污染

　　(1)污染不严重。用乙腈或者甲醇 0.1mL/min或 0.2mL/min 小流速冲洗过夜。(2)按上述方法不能解决，则依下步骤依次进行清洗。① 水冲 20倍柱体积(4.6*250mm 色谱柱以 1mL/min 的流速大约冲 10min 左右);② 甲醇或乙腈冲 20 倍柱体积;③ 二氯甲烷或三氯甲烷冲 20 倍柱体积;④ 甲醇冲20 倍柱体积;⑤ 最后用乙腈保存。注意：若实在不能去除干扰峰建议可采用每五分钟进 50μL 的二甲基亚砜(DMSO)+ 水(1+1)混合液进行清洗。但DMSO 用过后一定要彻底清除它。