DNA扩增仪
1985年推出的聚合梅链反应PcR)技术,极大的改善了分子生物学的实验方法,当前对特定的DNA片段的分离,纯化及扩增已成为分子生物学研究的关键技术问题之一,用常规方法进行此项工作,操作繁杂效率较低,PcR技术作为“无细胞基因扩增系统”则可以在生物体外依靠TaqDNA聚合酶的催化作用在较短时间将目的基因扩增到100多万倍为基因分析提供有力的实验手段[1]、[2」。
DNA扩增仪又称热循环仪,它是进行PcR实验操作不可缺少的仪器。其关键是它有一个电脑控制的精密温度控制器,在仪器内样品管基座温度控制精度必须保证在士0.1℃,均匀度控制在士0.5℃以内,样品管之间不能形成温度梯度,如果这些温控条件保证不了,就会影响到DNA扩增。DNA扩增仪的热循环曲线如图1所示。
目前DNA扩增仪按其结构特征可分为两种主要类型:
恒温水浴加热型
DNA的扩增必须经过变性、退火、引物延伸三个步骤川,各有不同的温度要求,因此需要有三个精密温度控制器来控制三个带有磁力搅拌棒的恒温水浴锅,然后通过机械手把盛有样品管的金属基座在三个不同温度的恒温水浴锅内依次浸入,吊出往复循环,样品管的金属基座在水浴锅内停留时间,循环次数,起始和终止的时间和位置均由微机系统来控制,其原理由图2所示。
恒温水浴加热型DNA扩增仪最大特点就是摸拟人的实验操作,因为三个恒温水浴是各自独立分开进行温度调节控制的,温控精度可以很高又不需要冷却系统,但是因为它有机械手等的运动部件,也就增加了出现故障的几率,降低了可靠性,这是它的不足之处。国产1109型DNA扩增仪就属于此种类型的仪器。
金属块加热,致冷循环型
此种类型的DNA基因扩增仪,装样品管金属基座是直接加热或冷却的,
金属基座用铝钦合金制造,其传热和防腐蚀性能良好,并能迅速升温或降温,分别由电加热管和压缩机制冷系统来实现,这样仪器结构很紧凑又没有机械传动装置,装样品管的金属基座是固定的,可以装较多的样品管,此种型式仪器原理如图3所示。美国PE.CETUSTel/450/9600系列nNA扩增仪就属于此种类型的仪器。国内复旦大学研制的PcR一100型和中科院遗传所研制的PcR一90型川DNA扩增仪采用半导体制冷器件对金属基座进行降温冷却,虽然降温速度没有制冷压缩机来的快,但是对实验室少量的样品来作还是比较适用的。
上面所说的各种类型DNA扩增仪都是采用单板微机或单片微机来控制,操作起来很方便,即使没有计算机使用经验的人,只要略看一下说明书就可以通过按键输入工作要求,仪器运行条件。按下运行键整个工作过程都由微机控制完成。今后随着国产仪器性能的完善和改进,是可以取代进口仪器来满足PcR实验要求的。
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