实时荧光定量PCR分析技术的应用

　　维护人类健康，提高全民健康水平，加强对重大疾病及疫情的预防与控制，是稳定社会、保障经济发展、强国健民的重要举措，是各国政府面临的重要任务之一。

　　随着科学技术的飞速发展，现代化的医用分析仪器对重大疾病及疫情的预控显示出了极其重要的作用，成为医务科技工作者敏锐的眼睛和有力的武器。近 年来随着我国卫生装备方面资金投入力度的加大，国外许多新型的医用分析仪器进入了国内，对提高我国医务科技工作者的诊断水准，推动医疗科技进步，以至于引 导我国医用分析仪器的发展都起到了巨大的推进作用。但应该看到的是，在引进先进分析手段的同时，国家也要花费大量的资金去购买国外的产品、试剂、备件等， 由于这些分析设备价格贵，因此只能在一些大医院或大型医疗科研、防疫单位使用，无法在中小型医院普及，使更多的患者受益。一些严重疾病的高发区往往集中于 经济欠发达地带，这些地方的医疗装备相对较差，无力购买昂贵的分析设备，致使疾病患者只能投奔距离较远的城市大型医院，人满为患是一方面，更主要的是贻误 病情，又可能造成交叉感染，还加重了患者本不富裕的经济负担，限制了我国公共卫生事业的提高与发展。

　　为改变这种情况，国内许多科研工作者及仪器生产厂家，多年来一直努力研制新型国产医用分析设备，开发出了许多适合国情的新型医用分析仪器，打破了国外的技术垄断，并抑制了进口产品的价格，为推动我国公共卫生基础建设及医用装备的现代化做出了应有的贡献。

　　聚合酶链式反应(P o l y m e r a s e C h a i nReaction,PCR)是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式，不通过活细胞，操作简便，在数小 时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个 D N A分子扩增 107～108倍，大大提高了 DNA 的得率。

　　伴随着荧光化学的发展，现如今的实时荧光定量PCR 技术已经实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，而且与传统 PCR 相比，它具有特异性更强、自动化程度更高、有效解决 PCR 污染等特点。目前不仅在分子生物学领域成为常规的方法和手段，而且在遗传性疾病的诊断、临床标本病原体的检测、法医学标本的鉴定等方面得到了广泛的应用。

　　实时荧光定量 PCR 技术是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

　　实时荧光定量 PCR 技术的定量检测是建立在两个基础之上的：

　　1. Ct值的重现性