流式细胞仪在血液学检验中的应用

　　1973年，美国BD公司与美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界第一台商用流式细胞仪FACSⅠ。进入90年代，流式细胞术作为一门生物检测技术已经日臻完善，随之而来的就是应用领域的日趋广泛。由于FCM标本要求是单细胞悬液，而血或骨髓有取材方便、利于系列追踪疾病发展等天然优势，因此FCM在血液学中的应用尤为广泛。

　　1 流式细胞仪的工作原理

　　流式细胞仪的结构一般可分为5部分：①流动室及液流驱动系统;②激光光源及光束成形系统;③光学系统;④信号检测与存贮、显示、分析系统;⑤细胞分选系统。

　　流式细胞仪可以检测单个细胞的可见光和荧光特性。通过检测细胞大小和内容物等物理特性可以对细胞进行分群。荧光染料可以连接或插入到DNA、RNA等细胞内容物中。另外，荧光染料连接的抗体能够与细胞膜上或其内部的特异蛋白结合。当标记细胞通过光源时，荧光分子被激发到较高的能级。当其回到基态后，荧光染料在较长的波长上释放光能。使用具有相似激发波长、不同发射波长的多种荧光染料，可以同时检测几种细胞特性。

　　在流式细胞仪内，待测细胞在鞘液包裹下单行排列，依次通过检测区域。流式细胞仪通常使用激光作为激发光源，激发光向各个方向散射，通过一系列的滤光片和双色性反光镜的分离，形成不同波长的荧光信号。光信号经光电倍增管接收后转换为电信号，经数/模转换器转换为可被计算机识别的数字信号。检测数据可以以直方图和二维散点图表示出来。

　　2 FCM 在血液学中的应用

　　2.1 用于血液/肿瘤细胞增殖动力学研究

　　细胞经DNA荧光染料如碘化丙啶(PI)、溴化乙啶(EB)、Hoechst等标记后，FCM可测定单个细胞DNA的含量，并描绘出DNA图形，经软件处理可计算出G0/G1、S、G2/M各细胞周期细胞所占的百分比。依据增殖指数可了解群体细胞的增殖活力。焦宁Y与FITC分别是RNA与蛋白质的特异性染料;PI与F1TC双染可测知单个细胞内DNA与蛋白质量的变化;丫啶橙(AO)染色法不仅可测定单个细胞DNA与RNA含量，还可区分出Go与G1期细胞;若丹明123(rhodamin 123)是线粒体特殊染料。通过以上各种特殊染色法，不仅可了解血/肿瘤细胞的增殖状况，更可用于化疗药物作用机制的探讨，从而将其区分为增殖周期特异性、非特异性药物，以及周期时相特异性、非特异性药物，以便更合理的配伍联合化疗方案，预测肿瘤细胞对药物的敏感性等。单参数DNA图形或AO染色DNA/RNA双参数法可显示非整倍体峰，理论上其灵敏度达万分之一。非整倍体细胞是肿瘤细胞的特异标志，在实体瘤中检出率为80%～90%，在白血病中约为30%～40%。非整倍体细胞克隆在肿瘤完全缓解期消失，复发前重现。因而FCM-DNA非整倍体测定在肿瘤的诊断、残存肿瘤细胞监测及预示预后中有重要价值。