BACTEC MGIT960全自动分枝杆菌培养鉴定药敏仪的动物实验模型分析

　　当前,结核病在世界范围内疫情回升,迄今仍然是危害人类健康的主要传染病。据世界卫生组织统计,全球约1/3人口感染了结核分枝杆菌。近10年来有3000多万人死于结核病。结核病已成为传染病中的第一号杀手和最大的死亡病因之一。为探索结核病控制的新途径,利用BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌培养鉴定药敏仪建立动物实验模型,以观察结核分枝杆菌的MPT64质粒DNA疫苗预防结核病的效力研究。

　　1　材料与方法

　　1·1　材料

　　实验动物:BALB/C小鼠由北京药检所动物中心提供。

　　结核分枝杆菌强毒株(H37RV)由中国药品生物制品鉴定所提供。

　　MPT64质粒DNA疫苗由我院结核病研究室提供。

　　BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌培养仪及其相关试剂由美国BD公司提供。传统L-J培养基由本室自制。

　　1·2　方法

　　将BALB/C小鼠36只分为两组(第一组16,第二组20,每组又分对照组和DNA预防组),先用我院自行研制的DNA疫苗免疫两月后,用H37RV结核分枝杆菌强毒株(5×106CFU/ML)攻击小鼠。第一组被攻击一个月后,将小鼠杀死,用75%乙醇浸泡小鼠20分钟,开腹取出肺、肝、脾,用无菌生理盐水冲洗,然后放入组织研磨器内研磨,取研磨好的组织悬液0·1ml加入到0·9ml生理盐水中混匀,取0·1ml接种于L-J培养管中进行普通培养,40天时进行菌落记数。同时,取0·5ml接种于BACTEC MGIT 7H9培养管中,加入0·8ml添加剂,放入BACTEC MGIT960培养仪内进行培养。第二组被攻击两个月后,将小鼠杀死,重复上述操作步骤,用BACTEC MGIT960培养仪进行培养。需每日观察培养结果,若为阴性结果需培养42天。

　　2　结　果

　　用H37RV结核分枝杆菌强毒株攻击一个月(第一组)的小鼠肺、脾、肝培养结果,样本最快检出时间为6天,90%阳性样本检出时间为7~13天,最迟检出时间为40天,41~42天均无阳性样本检出。脾脏样本检出结核分枝杆菌为100%,肺脏次之,肝脏样本仅为75%(12/16)。小鼠肺、脾、肝用BACTEC-960培养的每天GI平均值分别为44·2;14·93;20·38,手工培养40天报告培养结果,其培养结果的总体趋势与960基本相同。

　　用H37RV结核分枝杆菌强毒株攻击两个月(第二组)的小鼠肺、脾、肝培养结果,样本最快检出时间为5天,90%阳性样本检出时间为10~15天,最迟检出时间为30天,31~42天均无阳性样本检出。脾脏样本检出结核分枝杆菌仍为100%,肝脏样本仅为60%(12/20)。小鼠肺、脾、肝用BACTEC-960培养的每天GI平均值分别为18·19;16·78;15·53。二组生长指数(GI)值的比较(见表1)中,肺和肝数值明显降

　　低,差异显箸(P<0·05 )。小鼠脾的数值无明显变化。手工培养结果与960结果相近。