HPLC法测定黄瓜中的β-胡萝卜素

　　β- 胡萝卜素是类胡萝卜素中最主要的一种，广泛分布于动植物体内。β- 胡萝卜素是维生素A 的前体，在体内转化成维生素A，具有抗衰老等一系列生物学功能^[1]。但是动物细胞不能合成β- 胡萝卜素，只能通过从食物中摄取，因此蔬菜、水果、粮食作物等食品中β- 胡萝卜素的含量是判断其品质的一项重要指标。近年来高效液相的方法已成为测定食品中类胡萝卜素的主要手段^[2]，但黄瓜中β- 胡萝卜素的检测常采用薄层色谱法或分光光度法，专属性不强^[3]。本文采用高效液相色谱法测定黄瓜中β- 胡萝卜素的含量，具有快捷，灵敏度高，结果准确的特点。

　　1 材料、仪器与试剂

　　1.1 材料

　　黄瓜样品由中国农业科学院蔬菜所提供。

　　1.2 仪器与试剂

　　日本岛津 LC-MS2010A 液质联用仪，二极管阵列检测器，德国塞多利斯CP225D 电子天平，冷冻干燥机、氮吹装置等。β-胡萝卜素标准品购自Sigma公司;甲醇、乙腈、二氯甲烷均为色谱纯，购自美国Fisher公司;其余试剂均为分析纯;Millipore 超纯水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适应性

　　色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18(4.6mm ×250mm,5 μ m)。流动相为甲醇：乙腈 =3：7(A)和二氯甲烷(B )，梯度洗脱：0 - 5 m i n ，2 % B ;5-45min，B 相由2% 线形升至35%;45-55min，35%B;55-60min，B 相由35% 线形降至2%;60-70min，2% B。流速：1mL/min，检测波长 450nm，柱温35℃，进样量10 μL。该色谱条件下β- 胡萝卜素对照品及供试品的HPLC 色谱图如图1、图2 所示。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　将 5mg β - 胡萝卜素溶于 1ml 丙酮，配制成浓度为5mg/mL的储备液。并将上述储备溶液逐级稀释成10ng/ μL、20ng/ μL、50ng/ μL、75ng/ μL、100ng/ μL的对照品溶液。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　将 20 克黄瓜(鲜重)切成体积约为 0.5cm³见方的小块，于冷冻干燥机中干燥后研磨，加入5mL丙酮溶液研磨提取，重复研磨提取三次，直至残渣无色，合并丙酮溶液，常温氮气吹干，丙酮定溶至1mL，用0.45μm 微孔滤膜过滤后作为供试品溶液。以上操作应尽量避光以免β - 胡萝卜素降解。

　　2.4 标准曲线的绘制

　　将配置好的各级β-胡萝卜素对照品溶液按照上述色谱条件检测，以峰面积为纵坐标，浓度(ng/μL)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y=8272.6x+788.71,R=0.9995。表明β-胡萝卜素进样量在0.1μg-1μg间有良好的线性关系。

　　2.5 精密度实验

　　取上述浓度为50ng/μL的对照品溶液重复进样5次，由测得的峰面积计算得 RSD 值为 1.58%，说明仪器精密度良好。