HPLC法测定奶粉中VA含量的不确定度评定分析

　　目前, 我国在计量测试和疫病控制分析领域, 进行测量不确定度评定已较普遍, 但在化学分析领域, 尤其在食品分析领域, 对测试结果进行测量不确定度表述和评定的尚不多见。维生素A( 以下简称“VA”) 又称视黄醇, 具有促进机体生长, 维持视觉等功能。本文根据《测试实验中测量不确定度评定》( 曹志军著, 吉林科学技术出版社2007年出版) 对HPLC法测定奶粉中VA含量进行测量不确定度评定, 并对其不确定度来源及各分量进行量化分析和表述。

　　一、材料与方法

　　1.主要仪器与试剂

　　瓦里安高效液相色谱仪, PDA检测器, C18柱(15cm×4.6mm 5μm), BF- 2000M氮气吹干仪, VA( 美国西格玛公司出品), 甲醇(色谱纯), 水(去离子水)。

　　2.实验方法

　　HPLC测定奶粉中VA含量按GB/T5009 《食品中维生素A和维生素E测定》进行, 采用外标单点法定量。

　　(1)色谱条件

　　流动相: 甲醇: 水=93: 7; 流速: 1.0mL/min; 检测波长:325nm。

　　(2)VA标准使用液制备

　　准确吸取1.0mg/mL VA标准溶液1.0mL, 加脱醛乙醇稀释定容至10.0mL, 再准确吸取5.0mL, 加脱醛乙醇稀释定容至50.0mL, 得到10.0μg/mLVA标准使用液。

　　(3)样品溶液的制备

　　称取样品10.0g于250mL带磨口三角烧瓶中, 加入1g焦性没食子酸和50mL无水乙醇摇匀, 加15g氢氧化钾边加边摇以防温度过高, 待完全溶解后, 置于80℃水浴上皂化30min。皂化液分别用50mL、30mL、20mL乙醚萃取, 醚层用水洗涤至中性, 过无水硫酸钠柱滤入250mL烧瓶中, 在50℃水浴下浓缩至约5mL, 用氮气吹干, 立即用2mL无水乙醇溶解定容, 过0.45μm滤膜作为分析溶液。

　　二、数学模型

　　式中: y———试样中VA含量 (μg/g); h———样液VA的峰高(mAu); hs———标准使用液VA的峰高(mAu); Cs———标准溶液VA浓度(μg/mL); V———样液的定容体积(mL);m———样品的取样量(g)。

　　测量结果不确定度除应考虑上式中诸因子的影响外, 样品的前处理过程、测量重复性都对测量结果的不确定度产生影响, 则上式转化为下列数学模型。

　　三、不确定度来源

　　从测量过程和数学模型分析, 按分层评定方法( 马振东, 南开大学学报: 自然科学版, 2001, 34(3): 91- 95),本方法的测量不确定度来源归纳为:

　　1.实验室检测产生的不确定度

　　2.实验室各计算分量引起的不确定度

　　(1)样品称量引入的不确定度

　　(2)样品定容引入的不确定度

　　(3)标准溶液产生的不确定度