薄层扫描法在生命科学中的应用进展

　　1　引　言

　　薄层扫描法(TLC Scanning method)亦称薄层光密度法(TLC Densitometry)。它是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合起来的一种新型仪器分析方法。应用薄层扫描仪(或称薄层光密度计)可同时对各种复杂的样品进行分离和测定。鉴于其简便快速、灵敏准确、专属性好,因此在生命科学中得到广泛的应用。现已被国内外药典所采用[1]。

　　2　基本原理

　　薄层色谱法在各国已公认为法定方法[1],但作为定量测定的薄层扫描法,虽然早在50年代初就已进行研究,但进展较慢。直至70年代后应用了Kubelka-Munk理论推导出反射吸收度与浓度的函数关系才得以成功地解决。虽然当浓度增加至一定程度时不成线性,且与薄层板的性质有关,但是随着电子计算机发展与应用,在薄层光密度计内装有线性化器,由微型电子计算机的程序控制,通过0～1吸收度单位之间曲线上的7个点进行校正,使Kubelk理论曲线中的非线性化数据转变为线性值,使之符合Beer′s定律,即可定量测定,详见图1。

　　值得注意的是当使用线性化装置对Kubelk-Munk理论曲线校正时,如果校正不足或校正过头,都会使线性关系不好。这可在实际工作中通过测试进行解决,详见图2。

　　在定量测定中,与气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)类同,有外标法和内标法。采用外标法测定时,如果标准曲线通过原点则可用外标一点法;如果标准曲线不通过原点则可用外标二点法。上述方法皆由计算机直接将测定数据打印出来,亦可由已知不同浓度之积分值对浓度作图,求得线性回归方程计算样品浓度。

　　薄层扫描仪主要由光源、单色光器等7部分组成,详见图3。按其光学系统可分为单光束型、双光束型和双波长型等;按其测定方法而言又可分为透射法、反射法和透射反射法;按其扫描方式又可分为线性扫描法、锯齿扫描法和飞战点扫描法(或称微光点快速扫描法)。目前以锯齿扫描法和飞点扫描法为好。瑞士Cammag和日本岛津CS类型仪器皆采用之。鉴于各种型号的仪器的基本原理、扫描方法和应用范围等都大致相同,故本文就不加赘述。

　　3　实验方法

　　样品经预处理制成一定的溶液后,一些实验技术如:制板、点样和展开等对测定方法的重现性和准确度影响较大。所以国内外逐渐对此实行规格化、程序化。现简述如下:

　　3.1　制板　通常各国多采用德国Merck的预制板,而国内则以青岛的预制板为优。为了实验室使用方便起见,各国都已研制了不同类型的涂布器(有瑞士Cammag、日本岛津和我国的重庆产品等)。其涂布薄层均匀,厚度在0.2～0.3mm;制备板多为0.5mm。手动式涂布器适合于一般实验室使用,我们曾用北京青云仪器厂手动涂布器制备的薄层板与Merck板比较,测定结果差别不大。另一种自动涂布器适合于批量生产使用。它的质量较好。