透射电镜明暗场细胞超微结构的互换观察

　　用物镜光栏阻断散射(衍射)电子束，只让透射电子束通过而形成的影象，称为明场象。阻断主轴透射电子束，让散射电子束通过而形成的影象称暗场象。明暗场所得图象相反，反差颠倒。

　　目前，明场观察作为电镜的常规观察法，已在医学、生物学界得到了广泛的应用。而利用暗场观察生物样品往往被人忽视，尤其是采用明暗场，进行同一视野互换观察细胞超微结构，国内至今还未见报导。

　　本文利用明暗场互换方法，对兔脑垂体，大鼠肾脏、肝脏，猫脊髓神经节等牛物样品进行了观察。

　　材料与方法:

　　实验仪器为日本电子JEM-100CxⅡ型电镜。暗场象采用倾斜照明法获得[1]。此方法，象差小，图象质量好，并能方便地进行明暗场互换观察。

　　观察材料均为生物样品常规超薄切片。

　　将电镜精确合轴后，明场下观察，选择视野拍照，然后视野不变，转换暗场观察，以相同放大倍率再进行拍照。暗房处理后，可获得明场图象，暗场图象和明暗场叠加浮雕图象。最后，将获得的三种图象进行比较、分析和研究。

　　图象分析:

　　电镜图象为家兔脑垂体远部病变分泌细膨[2]。

　　1.明场图象:可见A细胞、B细胞和C细胞。A、B细胞胞质内可见大量电子密度高的分泌顺粒，线粒体峭消失呈空泡状，左下方为一毛细血管(图1)。

　　2.暗场图象:为明场图象同一视野，但反差颠倒。细胞微细结构清晰，能观察到细胞间质和毛细血管的细节(箭头所示);提高了反差，弥补了明场图象的不足(图2)。

　　3.明暗场叠加浮雕图象:将明场图象和暗场图象经暗房处理后即可获得。整个图象立体感强，层次清楚，具有三维图象的特点。细胞各部微细结构显示良好，尤其是细胞内分泌颗粒及膜性结构显示更为突出(图3)。

　　讨论:

　　明暗场互换观察可产生反差颠倒的两种电镜图象。由于互补不足，增加了细节和提高了反差，有助于细胞间质，管腔及脉系统等超微结构的观察和研究。明暗场互换观察对研究细胞超微结构具有一定的意义。

　　每台透射电镜均可参照暗场成象方法，进行明暗场互换观察。根据需要，随时都可进行明暗场图象的拍摄。

　　浮雕图象类似扫描电镜和蚀刻象双重特色。将透射电镜的平面二维结构图象变成具有立体感的三维图象。这既保存了明场图象和暗场图象的微细结构，又增加了立体感。操作简便，易于掌握，是一种值得提倡的方法。

　　将明场图象，暗场图象与浮雕图象结合使用，对研究医学、生物学的某些细胞超微结构具有一定的价值。如能与扫描电镜、蚀刻技术配合使用，其意义将更大。