红酒中八种合成着色剂检测

　　一、样品信息

　　二.实验目的

　　参照《食品中合成着色剂的测定》(GB/T5009.35-2003)，建立红酒中的合成着色剂的SPE-HPLC检测方法。

　　三.实验方法

　　3.1实验试剂

　　l 乙酸;

　　l 甲醇;

　　l 乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL;

　　l 氨水溶液：量取氨水2ml，加水至100mL，混匀;

　　l 甲醇/甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀;

　　l 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL溶解，混匀;

　　l 无水乙醇-氨水溶液-水：量取无水乙醇70mL，氨水溶液20mL、水10mL，混匀;

　　l 水(PH=6.0)：水加柠檬酸溶液调节PH=6.0;

　　l 水(PH=4.0)：水加柠檬酸溶液调节PH=4.0;

　　l 水：超纯水

　　l 合成着色剂储备液：每1.0mL中含柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝各0.5mg，诱惑红0.1mg的水溶液;

　　l 合成着色剂使用液：上述合成着色剂储备液逐级稀释成每1.0mL中含柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝各5μg，诱惑红1μg的水溶液;

　　3.2.实验耗材

　　3.3.试样处理

　　取试样(某品牌红酒)20ml,加入合成着色剂混标溶液1.0mL，混匀，用10%氨水调节PH约6.0，将全部试样经过Cleanert® JAX柱，分别用水(PH=4.0)、甲醇/加酸(6+4)溶液6mL淋洗，再用10mL水淋洗，用乙醇-氨水溶液-水(7+2+1)6ml洗脱，收集洗脱液于50℃水浴蒸发至干，加水定容至1.0mL，经0.45μm滤膜过滤，待测。

　　3.4液相色谱条件

　　色谱柱：Venusil® XBP C18，5μm;4.6*150mm;

　　流动相：A：0.02mol/L的乙酸铵溶液(乙酸调节pH=4);

　　B：甲醇

　　流 速：1.0mL/min;

　　进样量：20μL;

　　波 长：254nm;

　　梯 度：

　　四.实验结果

　　五、实验结论

　　实验结果表明，Cleanert® JAX小柱和Venusil® XBP C18液相色谱柱可以用于红酒中的合成着色剂的检测，该方法快速、准确。

　　六、注意事项

　　l 红酒样品呈弱酸性，在上样之前要将其pH值调节至6左右，保证小柱可对合成着色剂有良好地吸附;

　　l 若样品酒精度过高，建议在上样前对样品进行除醇处理;

　　l SPE小柱净化过程中，要注意对流速的控制，建议控制在1mL/min左右;

　　l 洗脱液氮吹复溶后，应选用水系滤膜过滤，防止因滤膜吸附造成样品的损失，建议选用Agela Hydrophilic PTFE滤头。