形态计量学在肝窦细胞超微结构研究中的应用

　　近年逐渐发展起来的体视学技术(sterology)是由二维结构信息定量推论三维结构信息的一门新兴的学科,此技术使形态学成为客观的,可重复性的定量研究,在生物医学领域得到日益广泛的应用。本室引进较先进的德国SIS全自动图像分析系统(由Philips固体阵列式CCD、SISAnalysis 2.0版图像分析软件等组成)。我们应用该设备对常规工作中的临床肝穿刺样品进行了形态计量学分析。每个肝细胞至少有两面和肝窦相邻接,肝窦状隙中存在有四种细胞,分别为内皮细胞、枯否氏细胞、贮脂细胞及隐窝细胞,此四类细胞在超微病理分析中常作为重要观察指标而被描述。为使肝窦细胞的观察分析更为客观;并使原有的定性描述逐步过渡到可重复的定量研究及三维体视学分析,我们应用形态计量学方法对其中的窦内皮细胞(Endothelial)及隐窝细胞(Pit cell)进行了测定以期对该两种细胞在病理状态下改变的意义有更深层的认识。

　　一、材料和方法

　　材料来源于临床及组织学、实验室检测明确诊断的慢性活动性肝炎(CAH)7例,慢性迁延性肝炎(CPH)10例。标本经3%戊二醛固定、1%锇酸后固定,逐级丙酮脱水、Epon 812树脂包埋,以常规方法制备成透射电镜样品。用专用接口将飞利浦CM100型透射电镜与德国SIS全自动图像分析系统直接联机。样品分别定位于中央静脉周围区域,炎反应区及可疑坏死区域。电镜观察时将随机拍摄的窦内皮细胞及隐窝细胞图像直接显示在图像分析仪监视器上,用多幅叠加功能获得贮存图像。经图像增强、灰度变换、明暗修正及形态滤波等图像处理方法获得高反差、低噪声的二次图像。针对窦内皮细胞及隐窝细胞的不同生物学特性,分别设定不同的细胞参数进行测量。

　　二、结果

　　1.窦内皮细胞形态及定量测定

　　电镜下显示CAH与CPH组间无明显差异,窦内皮细胞改变是一致的。定位于肝小叶中央静脉区域观察,内皮细胞大多呈现正常静止状态;定位于炎性反应区域见内皮细胞呈轻度增生活跃状态;定位于肝细胞明显受损区域内皮细胞大多表明为极度活跃状态,其胞质内明显出现致密包含物。具体形态如下。

　　(1).静止状态内皮细胞

　　内皮细胞呈扁平状,贴于窦壁与肝板密切接触,核为长梭形,核膜光滑、胞质内细胞器发育不全,仅有内质网,偶见囊泡,细胞表面无基膜附着(图1)。狄氏间隙结构清晰,血窦充盈,偶见枯否氏细胞。

　　(2).轻度活性内皮细胞

　　CAH及CPH定位于炎细胞反应区域可见内皮细胞呈活性轻度增强性改变。表现为:细胞体积略增大、细胞核外观呈卵圆形变,常脱离窦壁突入于血窦中,细胞器较丰富,主要为扩张的内质网,其池内常滞留不定形物质。线粒体常肿胀,微囊泡及颗粒物质增多,高尔基氏区增大(图2)。